PCR仪的使用和日常维护

更新时间：2021-02-05

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PCR仪的使用方法

1.1.1.1 操作步骤

(1) 开机：打开开关，视窗上显示“SELF TEST”，显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单：准备执行程序。

(2) 放入样本管，关紧盖子。

1.1.1.2 程序输入与选择

(1) 如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示：按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。

(2) 输入新的程序：

在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTER PROGRAM，按《Proceed》选择NEW，命名新的程序，多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)；输入程序步骤：名字输入后，显示，按《Proceed》则可以输入温度(0～100℃)，按《Proceed》确认后，则可以输入孵育时间，用《Select》键移动光标，输入数字，完成后按《Proceed》确认，跳到下一步，输入方式同上；选择GOTO，输入循环步骤时链接到第几步(循环数多可达9999次)(为实际循环数-1)。

选择option,显示：再选择increment,按《Proceed》确认，输入初始的温度，确认后输入时间，按《Proceed》确认，然后输入每个循环增加或减少的温度，增加用正值，减少用负值(-0.1℃～6℃)，按《Proceed》确认。

选择extend，按《Proceed》确认,输入每个循环增加或减少的时间(-60～60秒)，按《Proceed》确认；选择slop(指温度上升或下降的速率),输入温度的改变值(-0.1～1.5℃)按《Proceed》确认，然后输入加热或致冷的速度，按《Proceed》确认；选择End，输入结束步骤。

(3) 输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。

(4) 其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续

程序；用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。

(5) 编辑程序：

可以用《Cancel》键删除输错的值，输入新的值后按《Proceed》确认。对于未输完的程序，要先输入END，按《Proceed》将程序储存后才能删除。删除已经储存的程序：从RUN-ENTER菜单中选择RUN-PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择DELET,用《Select》选择删除。

(6) 查看程序的步骤：在主菜单上选择LIST，按《Proceed》，用《Select》将选择名称，再按《Proceed》，显示程序的一步，用《Select》键向前、向后翻页查看，此时不能改变程序的值。

(7) 编辑已有的程序：

从RUN-ENTER菜单中选择RUN-PROGRAM，按《Proceed》，显示主菜单，选择EDIT，按《Proceed》确认，用《Select》键选择要编辑的程序，按《Proceed》显示程序的一步。用《Select》键将光标移到要改变的温度或循环的值上，键入新值，按《Proceed》确认，按《Cancel》删除键入的值，出现空格，键入新值后确认。注：一旦值被改变或删除，原来的值不能恢复，必须重新键入。编辑时间值：必须重新键入小时、分钟、秒，按《Proceed》。

1.1.1.3 PCR体系设置

如何设置一个PCR体系：一般分为8步：

(1) 预变性：可用94～95℃，2～10min,一般用5min。

(2) 变性：一般用94℃，30s~2min,一般45s~1min。

(3) 退火：温度自定，30s~2min。

(4) 延伸：70～75℃，一般72℃，对于<2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。

(5) 循环数：一般25～35个循环。

(6) 终延伸：72℃，5～15min。

(7) 保存：10℃，时间设为0。

(8) END。

1.1.2 PCR仪使用中的一些小技巧

(1) 仔细阅读仪器使用说明书，这样可以充分发挥仪器的性能并避免发生错误。

(2) 程序设计完成后，一定要仔细检查，以免出错造成损失。

(3) 常用的程序调用以前使用过的正确程序文件；样品量较小时，在样品槽的两边各加上两排8联管，这样可使热盖平整，加热效果好，有利于效果的稳定性。

(4) 在进行各种试剂加样时，相同的试剂要一起加后再分装，要用同一只吸液器及同一个枪头。

(5) 加样完成后，用酶联板离心转头将管离心一下，使反应液到管底，因为反应液在管壁或管盖上时，会严重影响实验结果。

1.1.3 PCR仪的维护和保养

PCR仪器不是一种计量仪器，其主要作用原理与基本计量要素密切相关，要求较高，一旦失控，仪器将不能正常工作，所以PCR仪器也需要定期检测和维护，这对依赖自然风降温的PCR仪器尤为重要。下面介绍一些具体的保养维护方法：

1.1.3.1 PCR仪的清洗

(1) 样品池的清洗：先打开盖子，然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡样品池5min，然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液体，用棉签吸干剩余液体；打开PCR仪，设定保持温度为50℃的PCR程序并使之运行，让残余液体挥发去除。一般5～10min即可。

(2) 热盖的清洗：对于荧光定量PCR仪，当有荧光污染出现，而且这一污染并非来自样品池时，或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时，需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面，确保样品池的孔干净，无污物阻挡光路。

(3) 仪器外表面的清洗：清洗仪器的外表面可以除去灰尘和油脂，但达不到消毒的效果。选择没有腐蚀性的清洗剂对PCR仪的外表面进行清洗。

(4) 更换保险丝：先将PCR仪关机，拔去插头，打开电源插口旁边的保险盒，换上备用的保险丝，观察是否恢复正常。

1.1.3.2 PCR仪的维护

(1) PCR仪器需要定期检测，视制冷方式而定一般半年至少一次。

(2) PCR反应的要求温度与实际分布的反应温度是不一致的，当检测发现各孔平均温度差偏离设置温度大于1～2℃时，可以运用温度修正法纠正PCR实际反应温度差。

(3) PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制，要求越短越好，当PCR仪的降温过程超过60s，就应该检查仪器的制冷系统，对风冷制冷的PCR仪要较*地清理反应底座的灰尘;对其他制冷系统应检查相关的制冷部件。

(4) 一般情况如能采用温度修正法纠正仪器的温度时，不要轻易打开或调整仪器的电子控制部件，必要时要请专业人员修理或利用仪器电子线路详细图纸进行维修。