PCR仪的使用方法

更新时间：2021-02-05

浏览次数：2074

方法：

1、将DNA加热（至90~95℃）变性，bai 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板。

2、则是令 Primers于一定的温度下（冷却至55~60℃）附着于模板DNA两端。后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下（加热至70~75℃）进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。

标准PCR仪也叫做终点PCR仪，是指目的基因仅经过预变性、变性、退火、延伸阶段产生大量的核酸序列的PCR仪，PE-Cetus公司推出的一台PCR自动化热循环仪属于此种。

根据PCR退火温度和扩增条件（细胞内/外），标准PCR又可以分为三类：普通PCR、梯度PCR和原位PCR。

PCR是分子生物学研究极其重要的工具，是一种用于放大扩增特定的DNA段的分子生物学技术，基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制，即人为创造核酸半保留复制条件，使目的DNA在细胞外完成扩增的过程，它可被看作是生物体外的特殊DNA复制。

扩展资料

1、普通PCR仪：一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为普通PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。主要是用作简单的、对单一退火温度的目的基因的扩增。主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。

2、梯度PCR仪：普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。梯度PCR仪每个孔的温度可以在范围内按照梯度设置，一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度)。由于被扩增的DNA段不同，其退火温度也不同，通过梯度设置。

可一次性筛选出的退火温度。这样既可节省试验时间，提高实验效率，又能节约实验成本。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。梯度PCR仪多应用于科研、教学机构。

3、原位PCR仪：是将PCR技术的高效扩增与原位杂交的细胞定位结合起来，用于从细胞内靶DNA的定位分析的细胞内基因扩增仪，从而在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技术的待检标本一般先经化学固定，以保持组织细胞的良好形态结构。

细胞膜和核膜均具有一定的通透性，当进行PCR扩增时，各种成分，如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可进进细胞内或细胞核内，以固定在细胞内或细胞核内的RNA或DNA为模板，于原位进行扩增。