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更新时间：2023-06-30 
浏览次数：523普通PCR和荧光定量PCR的检测方式具有较大的差别。荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光，普通PCR通过检测插入DNA中核酸染料的量来测定PCR最终产物量。荧光定量PCR可以通过扩增曲线进行精确定量，普通PCR则是通过电泳的方式进行定性分析。那么在普通PCR和荧光定量PCR的引物设计方面，有什么相同点和不同点呢？今天小编就给大家汇总一下。
相同处：
▶ 序列的查找是一致的。
▶ 序列选取应在基因的保守区段。
▶ 选取合适的扩增片段大小。
▶ 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对。
▶ 避免引物自身形成环状发卡结构。
▶ Tm值在55－65℃，GC含量在40%－60%。
▶ 引物之间的Tm相差避免超过2℃。
▶ 引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基。
不同处：
荧光定量PCR 引物
▶ PCR产物长度：要求在300bp以内，一般80-150bp之间。
▶ 引物特异性：对引物要求高，尽量减少引物二聚体的产生，熔解曲线要求单一产物。
▶ 扩增效率：荧光定量 PCR的目的是进行定量或者相对定量，扩增效率应在90%—110%之间。
▶ 多对目的基因同时扩增，文献上查来的引物条件会不同，需要设计尽可能条件一致的引物。
▶ 目的基因含量比较低时，需要设计灵敏度比较高的引物。
普通PCR 引物
▶ 普通PCR的扩增长度，根据实验的要求不同，一般是从150bp到几千bp不等。
▶ 相对于荧光定量PCR，普通PCR对二级结构要求较低。
▶ 对扩增效率要求不高。
▶ 可以选用梯度PCR仪，选择不同退火温度，对引物退火温度要求不需要一致。
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