荧光定量PCR耗材的使用和选择

更新时间：2021-04-09

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高通量的96孔PCR板和8联管是在聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中，主要作为参与扩增反应的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、缓冲液等的承载物。医疗级聚丙烯（PP）材质因其高的纯净度和稳定性，能更好适应PCR反应过程中反复高低温设定，并且能够实现高温高压灭菌操作，常常被用于PCR耗材的生产。随着荧光定量PCR技术的普及，该技术被广泛用于遗传、生化、免疫、医药等领域，不仅应用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA，RNA的研究领域。

如何正确使用96孔PCR孔板

PCR板有透明和乳白色可选，其中乳白色更适合用于顶部采集荧光信号的新型荧光定量PCR仪（如伯乐CFX系列，ABI 7500fast 以上型号， Roche 480系列），但如果荧光定量PCR仪是底部光源的，则应选择透明的。
PCR板根据裙边设计又可分为无裙边、半裙边和全裙边三种设计模式，不同厂家的荧光定量PCR仪会设计不同的切角或边缘凸起，请选择适合该PCR仪的板子。
PCR板又分100ul体积（矮板）和200ul体积（高板），根据机型的不同选择，选择不同高度孔板，避免高度错误对机器造成破坏和加热不均导致数据失真。
当使用96孔板做荧光定量PCR实验的时候，推荐使用光学膜代来密封反应孔。正确的封膜方法是：先沿着96孔板的纵向压膜，然后横向，最后沿着板的边缘按压使之密封。具体手法见下面图示：

加样后会在管壁上飞溅一些小液滴，另外反应体系内也会有一些气泡，需要离心去掉挂壁液滴和气泡。请使用的微孔板离心机解决上述问题。

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